DH5α感受态细胞

产品货号：

SN0080

中文名称：

DH5α感受态细胞

英文名称：

DH5α Chemically Competent Cell(SCC01)

产品规格：

100μL×10

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

DH5α感受态细胞采用大肠杆菌DH5α突变株经特殊工艺制作，可用于DNA的化学转化。本制品对于＞15kb质粒的转化效率无明显降低，最大可转化50kb质粒。重组酶缺陷型（recA1）减少插入片段的同源重组率，保证了插入DNA的稳定性，lacZΔM15的存在使CheCom 5α可用于蓝白斑筛选。

基本信息：
基因型：F^- φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 deoR recA1 endA1 hsdR17 (r_K^-,m_K⁺) phoA supE44 λ^- thi-1 gyrA96 relA1
转化效率：使用pUC19质粒DNA检测，转化效率高达1.5×10¹⁰ cfu/μg。

产品特点：
超高的转化效率：兼容Amp抗性质粒的10min快速转化及Kana抗性质粒的30min快速化。
recA1和endA1的突变有利于DNA的稳定克隆及高纯度质粒DNA的提取。

适用范围：
DH5α感受态细胞适用于DNA的化学转化、蓝白斑筛选等实验。

产品组成：

组分	规格
5α感受态细胞	100μL×10
pUC19对照质粒(10ng/μL)	10μL

保存：-80℃，有效期6个月。

注意事项：

本制品具有链霉素抗性。
请勿将感受态反复冻融。
感受态细胞应插入冰上缓慢融化（请勿用手握化）后立即加入目的DNA，此时转化效率最高。
感受态细胞融化后长时间置于冰上不加目的DNA会降低转化效率。
加入目的DNA时应轻柔操作。
目的DNA不能超过感受态总体积的1/10。
微量目的DNA转化时，建议按照常规转化方法进行。
Kana抗性质粒快速转化流程必须复苏至少20min。由于Amp抗生素和Kana抗生素作用机理不同，Amp抗生素通过阻止细菌细胞壁的合成来抑制细菌生长，Kana抗生素与细菌30S核糖体结合从而使mRNA密码误读，因此Kana抗性质粒的转化须复苏，使细菌细胞内积累一定量的抗性基因表达产物。

使用方法：
一、常规转化流程

取100μL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻柔混匀，冰上静置30min。
42℃水浴热激45s，迅速冰上静置2min（注意不要晃动离心管，以免降低转化效率）。
向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏1h。
根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

二、快速转化流程

Amp抗性质粒10min快速转化流程
- 取100μL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀，冰上静置5min。
- 42℃水浴热激45s，迅速放回冰上静置2min（该过程注意不要晃动离心管，以免降低转化效率）。
- 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
- 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
Kana抗性质粒30min快速转化流程
- 取100μL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀，冰上静置5min。
- 42℃水浴热激45s，迅速放回冰上静置2min（该过程注意不要晃动离心管，以免降低转化效率）。
- 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏至少20min。
- 根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
- 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

常见问题：

转化后平板不长菌或长菌数较少？
- 上游连接效率较低。建议检查上游插入片段质量、连接比例、反应温度及时间是否合适。
- 感受态细胞失效或效率降低。使用新鲜感受态细胞，感受态请勿反复冻融，建议使用本制品中附带pUC19质粒做一组阳性对照实验。
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，抗生素种类、用量是否正确，建议重新配制平板重复实验。
转化后平板出现卫星菌落或杂菌？
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，用量是否正确，氨苄抗性可适当提高抗生素浓度。
- 培养温度或时间不合适。检查培养箱温度，37℃培养时间不宜过长。
- 存在污染。感受态细胞在操作过程中被污染，建议做一组阴性对照实验（不加DNA只转化空感受态于抗性平板）检查操作过程是否污染了相同抗性的菌株。若存在污染，建议更换试剂及耗材，可使用核酸清洁剂对实验台面、环境进行清洁。

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